用固定液固定動植物整體或它的一部分組織和氣管等,能保存組織内細胞的形态、結構及其組成,盡量使它近于生活狀态。固定液一般有防腐和保存的作用,分爲單純固定液和混合固定液。單純固定液中最重要的有乙醇、福爾馬林、醋酸、苦味酸、鉻酸、重鉻酸鉀、升汞等,前兩種固定液是中學生物實驗室常用的。單純固定液的優點是簡便,缺點是有一定的局限性,不易達到理想的固定要求。混合固定液有幾種不同的藥液按一定的比例混合而成,使各自的優缺點相互補充,成爲較完美的固定液。這種固定液的制備雖比較麻煩,但是效果比較好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福爾馬林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。
常用的保存液大緻跟固定液相同,主要是福爾馬林、酒精、甘油以及由這些藥物按比例配制成的各種混合液。有時按特殊保存的需要,再保存液中增加某些藥品(如原生标本的保存液)。
1、福爾馬林
福爾馬林在固定組織标本時殺菌能力強,所以防腐性強,滲透力大,固定得快。永福爾馬林固定精細的解剖标本時,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。
固定液常用的濃度是5~10%(根據材料的大小、性質和數量而定)。
保存液常用的濃度是5~10%。用福爾馬林作保存液,效果好且價格低廉。
在配制福爾馬林溶液(固定液或保存液)時,應将37~40%的甲醛作爲整個溶質來配。例如配制5%福爾馬林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸餾水混合。實際上甲醛含量隻有1.9~2%,這樣的配法已成爲一般實驗室常用的慣例。
注意事項:
(1)福爾馬林業在長期貯存中會産生蟻酸,可适量的加入碳酸鈣( )或碳酸鎂( )等堿性物質進行中和。
(2)福爾馬林業作爲保存液會慢慢揮發而緻使濃度降低,并且福爾馬林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液變濁,影響觀察。所以,根據一定保存期的情況,可适當增加福爾馬林液的濃度或更換新液,以防标本變壞。其中如有白色沉澱物,加熱後可使它溶解。
(3)市售的福爾馬林液常帶有酸性,能腐蝕石灰質,因此,最好不用福爾馬林液浸制有石灰質外殼的動物。
2、酒精(乙醇)
酒精也是常用的固定液,它有強烈的殺菌作用,對組織材料的滲透力較大,固定的快。但是,它的脫水作用較強,在高濃度的酒精中容易使材料顯著硬化和收縮。一般用于固定浸制标本材料,分一級或二級固定,即70%或50%與70%的酒精。有些小型材料或精細的解剖材料,最好用二級或三級固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最後再進行保存。從經濟效果來考慮,一般酒精應跟福爾馬林液等固定液混合使用。
市售的工業用酒精濃度是95%左右,因此用時要重新配制。保存液的濃度通常是70%。
注意事項:
(1)在固定材料時要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必須先往體内注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料内部腐懷變質。用福爾馬林液固定也是如此。
(2)高濃度的酒精有脫水、脫脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本(如腦、脊髓)等都不宜用較高濃度的酒精作保存液。
(3)爲了防止酒精使标本硬化,保存一些精細的材料或解剖标本時,因加入少量甘油,因爲甘油具有潤軟組織的作用。
(4)忌跟鉻酸、锇酸和中鉻酸鉀等氧化劑配合。
3、醋酸
醋酸即乙酸,純醋酸在低于16.7攝氏度時會凝成冰狀固體,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透組織,因爲它不能沉澱細胞質中的蛋白質,組織不會硬化。一般常跟酒精、福爾馬林、鉻酸等容易引起組織變硬和收縮的液體混合,以起到相互抵消的作用。
醋酸固定液的常用濃度是0.3%~5%。
4、苦味酸
苦味酸是一種黃色結晶,能溶于水(溶解度是0.9~1.2%)、酒精(溶解度是4.9%)和苯(溶解度是10%)。苦味酸也能沉澱一切蛋白質,穿透較慢,固定後,組織收縮明顯,但不使組織硬化。
苦味酸固定液可以在100毫升蒸餾水中加入苦味酸約1.5克,制成飽和水溶液。固體苦味酸易爆,長制成飽和水溶液保存。
5、升汞
升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以針狀結晶爲最純。通常固定時用飽和水溶液,有時也用70%酒精作溶劑,不單獨用作固定劑。升汞的穿透力較弱,通常用于小型材料,對蛋白質有強烈的沉澱作用,硬化程度中等。
固定液用飽和溶液,濃度約爲7%。
6、卡爾氏(Carl’s)液
配方
95%酒精 170毫升 蒸餾水 280毫升
福爾馬林 60毫升 冰醋酸 20毫升
冰醋酸要在臨用前加入。
這時極好的昆蟲保存液,常用來殺死和保存小型、身體柔軟的種類入螨、蜈蚣、馬陸等。在這溶液裏加入少量甘油,能防止蟲體變脆。
7、卡諾氏(Carnoy’s)液
配方
純酒精 6份 冰醋酸 1份
氯仿 3份
這種固定液能固定細胞質和細胞核,尤其适宜于固定染色體,所以多用于細胞學的質片,還用來固定腺體、淋巴組織以及原生動物的胞殼等。這種固定液穿透得快,因此一般小塊組織固定20~40分鍾,大型材料不超過3~4小時。固定後用95%或純酒精洗滌,換液兩次,移到石蠟中或用80%酒精保存。
8、吉爾桑氏(Gilson)液
配方
60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升
80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克
蒸餾水 440毫升
這是常用的固定液,适用于肉質菌類,特别是柔軟膠質狀的材料如木耳等,也廣泛用于無脊椎動物和一般組織和蛙胚的固定。固定時間18~20小時,然後用50%酒精沖洗材料,除去升汞。如果用水沖洗,會使材料膨脹。混合液保存24小時後失效。
9、福爾馬林–醋酸–酒精溶液(FAA)液
配方
50%酒精 85毫升 福爾馬林 10毫升
冰醋酸 5毫升
這種固定液适用于固定一般植物莖、葉組織,昆蟲和甲殼類動物。液組織在這溶液裏固定12小時,木質化組織要固定1周,材料也可在此液中長期保存。固定後的材料放在50%酒精中沖洗1~2次。
10、克來甯堡氏(Kleinenberg’s)液
配方
在20%硫酸水溶液内加入苦味酸,直到飽和。
這種固定液适用于雞胚的固定,也用于許多小型海洋生物的固定。
11、包因氏(Bouin’s)液
配方
苦味酸飽和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升
福爾馬林 25毫升
這是常用的良好固定劑,滲透迅速,固定均勻,組織收縮少,染色後能顯示一般的微細結構。一般動物組織、無脊椎動物的卵和幼蟲以及一般組織學、胚胎學的材料,如植物組織的根尖和胚囊都可用它來固定。一般組織固定24~48小時,小塊組織固定4~16小時,動物材料能在這種固定液中長期保存。固定後,動物材料用70%酒精沖洗淨苦味酸,到無黃色爲止(用酒精沖洗時,加幾滴氨水,可加快除去黃色);植物材料用20%酒精沖洗幾次。
12、紹丁氏(Schaudinn’s)液
配方
甲液 升汞飽和水溶液 66毫升
95%酒精 33毫升
乙液 冰醋酸 1毫升
甲、乙液要在臨用前混合。
這種固定液适用于固定有鞭毛的原生動物、植物的精子和遊動孢子等。材料如制作塗布裝片,可在40攝氏度下固定10~20分鍾。
13、眼球固定液
配方
丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升
升汞 2克 甲醛 10毫升
蒸餾水 40毫升
這種固定液适用于眼球的固定,并可在固定液中長期保存。
14、納瓦興氏(Nawaschin’s)液
配方
甲液 鉻酸 1.5克 冰醋酸 10毫升
蒸餾水 90毫升
乙液 福爾馬林 40毫升 蒸餾水 60毫升
臨用前将等量甲、乙液混合。
高等植物有絲分裂材料适宜在這種固定液裏固定或長期保存。
15、綠色标本保存液
配方一
硫酸銅 5克 水 95毫升
這種保存液适用于綠色植物和一切植物綠色部分的保存。植物放入硫酸銅液後,由綠變黃,再由黃變綠。這時取出材料,用清水漂洗幹淨,浸在5%福爾馬林液内長期保存。
配方二
硫酸銅 0.2克 95%酒精 50毫升
福爾馬林 10毫升 冰醋酸 5毫升
水 35毫升
先把硫酸銅溶于水中,然後加入配方中的其他組分。綠色标本能長期的貯存在該液中。
配方三
醋酸銅 15~30克 50%醋酸 100毫升
在50%醋酸中逐漸加入醋酸銅,直到飽和。适用時取原液1份,加水4份,即成稀釋的硫酸銅溶液。
這種保存液适用于表面有蠟質、蛙質、質地較硬的綠色植物保色。加熱稀釋到醋酸銅溶液,放入植物,輕輕翻動,到植物由綠轉黃再轉綠色時取出植物,用清水漂洗後,浸入5%福爾馬林液内保存。
16、紅色标本保存液
配方一
甲液 硼酸 3克 福爾馬林 4毫升
水 400毫升
乙液 亞硫酸 2毫升 硼酸 10克
水 488毫升
把紅色的果實浸在甲液裏1~3天,等果實由紅色轉深棕色時取出,移到乙液裏保存,同時在果實内注入少量乙液。
配方二
氯化鋅 2份 福爾馬林 1份
甘油 1份 水 40份
先把氯化鋅溶解在水裏,然後加入配方中其他組分。溶液如果渾濁而有沉澱,應過濾後使用。紅色果實能在此液中保存。
17、黃色标本保存液
配方一
甲液 硫酸銅 5克 水 95毫升
乙液 6%亞硫酸 30毫升 甘油 30毫升
95%酒精 30毫升 水 900毫升
先把植物标本在甲液中浸1~2天,取出洗淨後,浸入乙液中保存,同時在果實内注入少量乙液。
配方二
6%亞硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升
水 450毫升
植物材料能在這種保存液中長期保存。
18、紫色标本保存液
配方一
95%酒精 20毫升 福爾馬林 20毫升
水 60毫升
使用時,取1份原液加9份水稀釋,植物材料能在這溶液中保存。
配方二
食鹽飽和水溶液 30毫升 水 175毫升
福爾馬林 20毫升 甘油 少量
植物材料能在這溶液中保存。
19、白色标本保存液
配方一
甲液 5%硫酸銅溶液
乙液 1~4%亞硫酸溶液
全白色植物材料能浸在乙液中保存。雜有綠色的白色植物材料先浸在5%硫酸銅溶液内1~3天,用清水漂洗後浸在乙液中保存。
配方二
氯化鋅 32克 95%酒精 125毫升
水 1000毫升
把氯化鋅溶于水中,再加入酒精。植物材料能在這溶液中保存。
20、綠色幼蟲保存液
甲液 福爾馬林 4毫升 醋酸銅 1克
硝酸鉀 1克 水 100毫升
乙液 甘油 20毫升 醋酸鉀 10克
福爾馬林 1毫升 水 100毫升
先把昆蟲幼蟲放在80攝氏度熱水中燙死,曬幹後放在甲液中固定1星期左右,最後放入稀釋一倍的乙液中保存。
配方二
甲液 95%酒精 90毫升 甘油 2.5毫升
福爾馬林 2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升
氯化銅 3克
乙液 冰醋酸 5毫升 福爾馬林 4毫升
水 100毫升
将絕食1~2天的幼蟲,用注射器從肛門向體内注射甲液,12小時後轉入乙液内保存,約20天更換1次乙液。
21、黃色幼蟲保存液
甲液 苦味酸飽和液 10毫升 冰醋酸 5毫升
福爾馬林 2.5毫升
乙液 與綠色幼蟲保存液配方二乙液相同
用注射器從幼蟲肛門内注入甲液,12小時後轉入乙液内保存。
22、紅色幼蟲保存液
硼砂 2克 50%酒精 100毫升
昆蟲幼蟲能在這溶液中保存。
23、動物内髒原色保存液
甲液 福爾馬林 200毫升 硝酸鉀 15克
醋酸鉀 30克 水 1000毫升
乙液 甘油 200毫升 醋酸鉀 100克
麝香草酚 2.5克 水 1000毫升
先把材料放在甲液内固定,固定時間根據材料的大小而定,一般需1~5天。當材料失去自然色澤而呈暗褐色時,用手輕輕擠壓,直到沒有淡紅色血水流出時,取出材料,用清水沖洗,在浸在85%酒精中3~24小時(不能太久,否則易破壞色素),到血色恢複後,浸在乙液中保存。